펩티드 활성 제약 성분 (API)은 높은 특이성, 낮은 독성 및 광범위한 질병 치료 가능성으로 인해 제약 산업에서 상당한 관심을 끌었습니다. 주요 펩티드 API 공급 업체로서, 우리는 고급 합성 방법을 통해 고품질 펩티드 생성물을 제공하기 위해 노력하고 있습니다. 이 블로그에서는 펩티드 API가 합성되는 다양한 방법을 탐구 할 것입니다.
고체 - 상 펩티드 합성 (SPP)
고체 - 상 펩티드 합성은 펩티드 API를 합성하는 데 가장 널리 사용되는 방법 중 하나입니다. 이 접근법은 1963 년 Robert Bruce Merrifield에 의해 개척되었으며, 이로 인해 펩티드 합성을 혁신하고 1984 년에 노벨 화학 상을 받았습니다.
SPP의 기본 원리는 제 1 아미노산의 C- 말단을 수지와 같은 불용성 솔리드 지지대에 부착시키는 것입니다. 이 수지는 후속 화학 반응을위한 안정적인 플랫폼을 제공합니다. 부착 된 아미노산의 아미노기는 적합한 보호 그룹, 전형적으로 FMOC (9- 플루오레 닐 메틸 옥시 카르 보닐) 또는 BOC (Tert- 부틸 옥시 카르 보닐)로 보호된다.
제 1 아미노산이 수지에 부착되면, 아미노기의 보호 그룹이 제거되어 반응성 아미노기를 노출시킨다. 또한 아미노기 보호 기능을 갖는 다음 아미노산은 커플 링 시약을 사용하여 이전에 부착 된 아미노산의 유리 아미노기에 결합된다. 일반적으로 사용되는 커플 링 시약은 DIC (N, N ' - Diisopropylcarbodiimide), HBTU (O -Benzotriazole -N, N, N', N ' - Tetramethyl -Uronium -Hexafluoro -Phosphate) 및 Hatu (O- (7 -Azabenzotriazol -1 -N, N', N, N, N, N, N, N, N, N, N, N, N, N, N, N, N, N, N, N, N, N, N, N, N, N, N, N). 테트라 메틸 루로늄 헥사 플루오로 포스페이트).
각각의 커플 링 단계 후, 반응되지 않은 아미노기는 결실 시퀀스의 형성을 방지하기 위해 캡핑된다. 이것은 일반적으로 아세트산 무수물을 사용하여 수행됩니다. 원하는 펩티드 서열에서 각각의 아미노산에 대해 탈 수성, 커플 링 및 캡핑의 사이클이 반복된다.
전체 펩티드 서열이 수지 상에 조립되면, 절단 칵테일을 사용하여 수지로부터 절단된다. 이 칵테일은 또한 합성 동안 아미노산에 존재하는 모든 측면 - 체인 보호 그룹을 제거합니다. 이어서, 절단 된 펩티드는 고 - 성능 액체 크로마토 그래피 (HPLC)와 같은 방법에 의해 정제된다.
용액 - 상 펩티드 합성
솔루션 - 상 펩티드 합성은 오래된 방법이지만 특정 상황에서는 여전히 장점이 있습니다. 이 방법에서, 모든 반응은 용액에서 발생하며, 펩티드는 고체지지에 부착되지 않습니다.
합성은 개별 아미노산의 아미노 및 카르 복실 그룹의 보호로 시작한다. SPP와 유사하게, FMOC 또는 BOC와 같은 보호 그룹은 아미노 그룹에 사용되며 에스테르 그룹은 카르 복실 그룹을 보호하는 데 사용됩니다.
첫 번째 단계는 디 펩티드를 형성하기 위해 2 개의 보호 된 아미노산을 결합하는 것입니다. 이것은 SPP에 사용 된 것과 유사한 커플 링 시약을 사용하여 달성됩니다. 디 펩티드의 형성 후, 디 펩티드의 한쪽 끝에서 보호 그룹을 제거하고,이어서, 다른 보호 된 아미노산 또는 디 펩티드와 결합하여 더 긴 펩티드를 형성한다.
프로세스는 원하는 펩티드 서열이 얻어 질 때까지 단계적으로 단계적으로 반복된다. 용액 - 상 합성의 도전 중 하나는 반응 혼합물이 다양한에 의한 생성물 및 미 반응 시동 물질을 함유하기 때문에 각 단계에서 중간 펩티드의 정제이다. 정제는 일반적으로 추출, 결정화 또는 크로마토 그래피에 의해 수행된다.
화학 결찰
화학 결찰은 전통적인 SPP 또는 용액 상 합성을 사용하여 조립하기 어려운 큰 펩티드 또는 단백질을 합성하는 강력한 방법입니다. 가장 잘 알려진 화학 결찰 방법 중 하나는 네이티브 화학 결찰 (NCL)입니다.
NCL에서, C- 말단 티오 에스테르를 갖는 펩티드는 N- 말단 시스테인 잔기와 다른 펩티드와 반응한다. 반응은 가벼운 수성 조건 하에서 발생하며, 두 펩티드 사이의 천연 펩티드 결합의 형성을 초래한다.
이 과정은 먼저 SPP 또는 용액 상 합성을 사용하여 2 개 이상의 펩티드 세그먼트를 합성하는 것을 포함한다. 한 세그먼트는 C- 말단 티오 에스테르로, 다른 세그먼트는 N- 말단 시스테인으로 준비됩니다. 그런 다음이 세그먼트는 적합한 완충액에서 혼합되고 결찰 반응이 발생합니다. 결찰 후, 필요한 경우, 시스테인 잔기는 추가 화학 반응을위한 핸들로서 추가로 변형되거나 사용될 수있다.
수렴 합성
수렴 합성은 SPP와 화학 결찰의 장점을 결합한 전략입니다. 전체 펩티드 서열을 선형 방식으로 합성하는 대신, 펩티드는 더 작은 세그먼트로 나뉘며, 이는 SPP를 사용하여 별도로 합성된다.
그런 다음이 세그먼트는 화학 결찰 방법을 사용하여 함께 결찰됩니다. 이 접근법은 큰 펩티드의 합성에 필요한 커플 링 단계의 수를 감소시켜 최종 생성물의 전체 수율 및 순도를 향상시킬 수 있습니다. 예를 들어, 긴 펩티드는 각각 10-20 개의 아미노산을 함유하는 3-4 개의 세그먼트로 나눌 수있다. 이 세그먼트는 수지에서 합성되고, 절단 된 다음 수렴 방식으로 결찰된다.
펩티드 API의 예
우리는 포함하여 광범위한 펩티드 API를 제공합니다C20- OTB -GLU (OBBU) -ATBI10 -ATBU) 사진 -O OIE -OANA -OE,,,C20 (OTBU) -GLU (OTBU), 그리고Palmitoyl -Glu (OSU) - OTBU. 이들 펩티드는 위에서 설명한 고급 방법을 사용하여 합성되어 고순도와 품질을 보장한다.
펩티드 API 합성에서의 품질 관리
품질 관리는 펩티드 API의 합성에서 가장 중요합니다. 우리는 제품이 최고 수준을 충족 할 수 있도록 포괄적 인 품질 관리 시스템을 갖추고 있습니다.
합성 후, 펩티드는 HPLC, 질량 분석법 (MS) 및 핵 자기 공명 (NMR)을 포함한 다양한 기술에 의해 분석된다. HPLC는 펩티드의 순도를 결정하는데 사용되는 반면, MS는 펩티드의 분자량을 확인하는데 사용된다. NMR은 펩티드의 구조 및 형태에 대한 정보를 제공 할 수있다.
또한 펩티드 API가 다른 저장 조건 하에서 안정적으로 유지되도록 안정성 연구를 수행합니다. 여기에는 상이한 온도, pH 값 및 다양한 부형제의 존재에서 펩티드를 시험하는 것이 포함됩니다.
결론
펩티드 API의 합성은 고급 기술과 엄격한 품질 관리가 필요한 복잡하고 다중 단계 프로세스입니다. 펩티드 API 공급 업체로서, 우리는 합성의 효율성과 품질을 향상시키기위한 새로운 방법과 기술을 지속적으로 탐색하고 있습니다. 고체 - 상 펩티드 합성, 용액 - 상 합성, 화학 결찰 또는 수렴 합성을 통해서도 고객에게 고품질 펩티드 제품을 제공하기 위해 노력하고 있습니다.
펩티드 API를 구매하는 데 관심이 있거나 펩티드 합성에 대해 궁금한 점이 있으시면, 조달 토론을 위해 문의하십시오. 펩티드 API 요구를 충족시키기 위해 귀하와 협력하기를 기대합니다.
참조
- Fields, GB, & Noble, RL (1990). 9- 플루오레 닐 메 톡시 카르 보닐 아미노산을 이용한 고체 - 상 펩티드 합성. 국제 펩티드 및 단백질 연구 저널, 35 (2), 161-214.
- Dawson, PE, Muir, TW, Clark -Lewis, I., & Kent, SBH (1994). 천연 화학 결찰에 의한 단백질의 합성. 과학, 266 (5186), 776-779.
- Chan, WC, & White, PD (2000). FMOC 고체 펩티드 합성 : 실용적인 접근법. 옥스포드 대학 출판부.