이봐, 동료 셀 애호가! TET -213 세포의 공급 업체로서, 나는 이러한 독특한 세포를 다루는 경험에 대해 공평하게 공유했습니다. 이 블로그에서는 TET -213 세포의 생존력을 유지하는 방법에 대한 몇 가지 팁을 공유하겠습니다.
먼저, TET -213 세포가 무엇인지 이해합시다. 그것들은 신경 과학 및 암 연구와 같은 다양한 연구 분야에서 큰 잠재력을 보여주는 세포주 유형입니다. 그러나 그들을 살아 있고 발로 차는 것이 항상 공원에서 산책하는 것은 아닙니다.
세포 배양 배지
모든 세포주를 유지하는 기초는 올바른 배양 배지입니다. TET -213 세포의 경우 고품질 매체가 필수입니다. 나는 보통 필수 영양소가 풍부한 매체를 사용하는 것이 좋습니다. 10% 태아 소 혈청 (FBS), 페니실린 및 스트렙토 마이신이 보충 된 RPMI 1640 배지는 저에게 놀라운 일을 해왔습니다. FBS는이 세포가 번성 해야하는 성장 인자와 호르몬을 제공하는 반면 항생제는 오염을 예방하는 데 도움이됩니다.
매체를 올바르게 보관하십시오. 4 ° C에 보관하고 빛으로부터 보호하십시오. 사용하기 전에 수조에서 최대 37 ° C를 데우십시오. 이것은 체온을 모방하며 세포에 더 편안합니다.
인큐베이션 조건
TET -213 세포는 환경에 대해 매우 까다 롭습니다. 그들은 5% CO₂와 함께 가습 대기에서 37 ℃에서 배양하는 것을 좋아한다. 이 환경은 인체의 생리적 조건과 매우 유사합니다.
좋은 인큐베이터에 투자하십시오. 안정적인 온도와 CO₂ 컨트롤이 있어야합니다. 인큐베이터의 설정 및 교정을 정기적으로 확인하여 모든 것이 순서대로 있는지 확인하십시오. 또한 인큐베이터를 정기적으로 청소하여 오염 물질의 건물을 방지하십시오.
하위 배양
하위 배양은 세포 생존력을 유지하는 데 중요한 단계입니다. TET -213 세포가 약 80-90% 합류 가능성에 도달하면 이제 분할해야합니다. 먼저, 오래된 배지를 제거하고 포스페이트 - 완충 식염수 (PBS)로 세포를 세척하여 잔해물을 제거하십시오. 그런 다음 트립신 - EDTA 용액을 첨가하여 배양 플라스크에서 세포를 분리합니다. 세포가 반올림하고 분리 될 때까지 플라스크를 37 ℃에서 몇 분 동안 배양하십시오.
세포가 분리되면 신선한 배지를 첨가하여 트립신을 중화시킵니다. 세포 현탁액을 저속으로 원심 분리하여 세포를 펠릿합니다. 신선한 배지에서 펠렛을 재현 탁시키고 적절한 파종 밀도로 세포를 새로운 배양 플라스크로 옮깁니다. 약 5 x 10⁴ 세포/cm²의 시드 밀도는 일반적으로 TET -213 세포에 적합합니다.
세포 건강 모니터링
정기적으로 TET -213 세포의 건강을 모니터링하는 것이 중요합니다. 위상 - 대비 현미경을 사용하여 세포 형태를 확인하십시오. 건강한 TET -213 세포는 균일 한 모양을 가져야하며 플라스크에 부착되어 있어야합니다. 떠 다니는 세포 또는 비정상적인 세포 모양과 같은 세포 사멸 징후가 발견되면 문제의 징후가 될 수 있습니다.
Trypan Blue 배제 분석과 같은 생존력 분석을 수행 할 수도 있습니다. 소량의 세포 서스펜션을 트리 판 블루와 혼합하십시오. 살아있는 세포는 염료를 제외하고 죽은 세포는 그것을 가져 가서 파란색으로 보입니다. 세포 생존력 백분율을 계산하기 위해 혈구 계를 사용하여 살아있는 세포의 수와 죽은 세포의 수를 세십시오.
시약의 품질
고품질 시약을 사용하는 것은 협상 할 수 없습니다. FBS, 항생제 및 기타 첨가제의 품질은 세포 생존력에 중대한 영향을 미칠 수 있습니다. FBS를 선택할 때 세포 성장을 지원하는 능력에 대해 테스트 된 배치를 찾으십시오. 만료 된 시약이나 시약을 부적절하게 저장 한 시약을 사용하지 마십시오.
고려해야 할 몇 가지 다른 요인은 TET -213 세포와 함께 사용될 수있는 펩티드입니다. 예를 들어,멜라노 사이트 단백질 PMEL 17 (130-138) (인간)세포 신호 전달과 관련된 일부 연구에서 잠재력을 보여 주었다.Urechistachininin I그리고Dynorphin A (1-17)또한 TET -213 세포 연구의 맥락에서 탐구 될 수있는 펩티드이다.
문제 해결
TET -213 세포의 생존력을 유지하는 데 문제가있는 경우 당황하지 마십시오. 몇 가지 일반적인 문제와 솔루션은 다음과 같습니다.
오염: 매체 또는 가시 식민지의 흐림과 같은 박테리아 또는 곰팡이 오염의 징후가 보이면 오염 된 배양을 즉시 폐기하십시오. 인큐베이터와 모든 장비를 철저히 청소하십시오. 세포를 처리 할 때 엄격한 무균 기술을 따르십시오.
세포 성장 불량: 세포가 잘 자라지 않으면 배양 배지를 확인하십시오. 매체가 오래되었거나 보충제가 제대로 작동하지 않을 수 있습니다. 또한 인큐베이션 조건이 올바른지 확인하십시오. 때때로, 온도 또는 COS 농도의 약간의 변화는 세포 성장에 영향을 줄 수 있습니다.
세포 분리: 세포가 너무 쉽게 분리되면 과도한 트립신 화 때문일 수 있습니다. 다음에 트립신 인큐베이션 시간을 줄입니다. 또한 트립신 -EDTA 용액이 신선한 지 확인하십시오.
결론적으로, TET -213 세포의 생존력을 유지하려면 세부 사항에주의를 기울이고 필요에 대한 이해가 필요합니다. 이 팁을 따르면 TET -213 세포를 건강하고 생산적으로 유지할 수 있습니다.
고품질 TET -213 셀을 시장에 나누고 있다면, 나는 당신과 대화를 나누고 싶습니다. 소규모 스케일 프로젝트 또는 대규모 스케일 바이오 테크 회사에서 일하는 연구원이든, 필요한 셀을 제공 할 수 있습니다. 귀하의 요구 사항과 함께 일할 수있는 방법에 대한 대화를 시작하십시오.
참조
- Freshney, RI (2016). 동물 세포의 문화 : 기본 기술 및 특수 응용의 매뉴얼. 와일리.
- Doyle, A., & Griffiths, JB (2012). 세포 및 조직 배양 : 실험실 절차. 와일리 - 블랙웰.