TET -213 세포의 펩티드 스크리닝은 특히 펩티드와 특정 세포주 사이의 상호 작용을 이해하는 데있어 생의학 연구 분야에서 중요한 과정이다. TET -213 세포의 공급 업체로서, 나는 이들 세포에서 성공적인 펩티드 스크리닝에 필요한 기술과 절차에 정통하다. 이 블로그에서는 TET -213 세포에서 펩티드 스크리닝을 수행하는 단계 (단계별 단계)를 안내합니다.
TET 이해 -213 세포
TET -213 세포는 인간 신경 모세포종 세포주의 한 유형입니다. 그들은 신경 기원으로 인해 연구에 널리 사용되므로 신경 기능, 발달 및 질병을 연구하는 데 귀중한 모델이됩니다. 이들 세포는 특정 조건 하에서 배양에서 유지 될 수 있으며, 이는 펩티드 스크리닝을 포함한 다양한 실험 조작을 허용한다.
펩티드 스크리닝을위한 제조
1. 세포 배양
펩티드 스크리닝을 시작하기 전에, TET -213 세포의 건강하고 적극적으로 성장하는 배양이 있어야한다. 세포는 전형적으로 10% 태아 소 혈청 (FBS), 1% 페니실린 - 스트렙토 마이신 및 기타 필요한 영양소가 보충 된 RPMI 1640과 같은 적합한 성장 배지에서 배양됩니다. 세포는 5% CO₂을 함유하는 가습 대기에서 37 ℃에서 유지되어야한다.
지수 성장 단계에서 세포를 유지하려면 정기적 인 하위 배양이 필요합니다. 세포가 약 70-80% 합류점에 도달하면 트립신 -EDTA 용액을 사용하여 계대를 할 수 있습니다. 이 효소 처리는 배양 플라스크로부터 세포를 분리시킨 다음 추가 실험을 위해 새로운 플라스크 또는 플레이트로 옮길 수 있습니다.
2. 펩티드 선택
스크리닝을위한 펩티드의 선택은 중요한 단계입니다. 펩티드는 TET -213 세포상의 특정 수용체와 상호 작용하는 능력, 세포 신호 전달 경로를 조절하거나 신경 보호 효과를 갖는 것과 같은 잠재적 생물학적 활성에 기초하여 선택 될 수있다. 뉴런 세포주에서 스크리닝에 사용되는 일부 일반적인 펩티드는 [베타 - 아밀로이드 (1-42), 마우스, 쥐] ( /카탈로그 - 펩티드 /베타 - 아밀로이드 -1-42- 마우스 - rat.html), [엔도 텔린 -1 인간] ( /catalog -peptides /endothelin -human.html) 및 [beta -1 -4), 인간] ( /카탈로그 - 펩티드 /베타 - 아밀로이드 -1-42 -Human.html).
이들 펩티드는 고체 상 펩티드 합성 기술을 사용하여 합성되거나 신뢰할 수있는 공급 업체로부터 구매 될 수있다. 불순물이 스크리닝 결과에 영향을 줄 수 있으므로 펩티드의 순도와 품질을 보장하는 것이 중요합니다.
3. 실험 설정
선별에 필요한 재료와 장비를 준비하십시오. 여기에는 멀티 웰 플레이트 (예 : 96- 웰 또는 384- 웰 플레이트), 피펫, 피펫 팁, 셀 카운터 및 현미경이 포함됩니다. 플레이트는 세포 접착을 촉진하기 위해 폴리 -D- 라이신과 같은 적합한 세포 외 매트릭스로 코팅되어야한다.
펩티드 스크리닝 절차
1. 세포 시드
TET -213 세포를 적절한 밀도로 코팅 된 다중 - 우물 플레이트에 시드하십시오. 96- 웰 플레이트의 경우 웰당 약 10,000-20,000 개의 세포의 시드 밀도가 종종 사용됩니다. 시딩 후, 플레이트를 24 시간 동안 인큐베이션하여 세포가 부착하고 회복되도록합니다.
2. 펩티드 처리
배양 배지에서 선택된 펩티드의 연속 희석을 준비합니다. 펩티드의 농도는 용량 - 반응 관계를 결정하기 위해 넓은 범위를 덮어야한다. TET -213 세포를 함유 한 웰에 펩티드 용액을 추가하십시오. 처리되지 않은 세포 및 비히클로 처리 된 세포 (예 : 펩티드가 DMSO에 용해되는 경우 DMSO)와 같은 적절한 대조군을 포함한다.
3. 인큐베이션
특정 기간, 보통 24-72 시간 동안 처리 된 세포와 플레이트를 배양하십시오. 인큐베이션 시간은 펩티드의 성질과 스크리닝의 종점에 따라 다릅니다. 이 기간 동안, 펩티드는 세포와 상호 작용하고 잠재적으로 다양한 생물학적 반응을 유도 할 것이다.
4. 세포 반응 평가
펩티드 처리에 대한 TET -213 세포의 반응을 평가하는 몇 가지 방법이있다.
세포 생존력 분석
세포 생존력은 MTT (3- (4,5- 디메틸 티아 졸 -2- YL) -2,5- 디 페닐 테트라 졸륨 브로마이드) 분석 또는 CCK -8 (세포 카운팅 키트 -8) 분석과 같은 분석을 사용하여 측정 할 수 있습니다. 이들 분석은 대사 활성 세포에 의한 테트라 졸륨 염의 감소에 기초하여, 분광 광도계로 측정 될 수있는 색 변화를 초래한다.
유전자 발현 분석
정량적 실수 - 시간 중합 효소 연쇄 반응 (QRT -PCR)을 사용하여 처리 된 세포에서 특정 유전자의 발현을 분석 할 수있다. 이것은 펩티드 - 유도 된 반응의 기본 분자 메커니즘에 대한 통찰력을 제공 할 수있다. 예를 들어, 세포 생존, 아 pop 토 시스 또는 뉴런 분화와 관련된 유전자를 조사 할 수있다.
단백질 발현 분석
웨스턴 블 롯팅 또는 면역 형광 염색은 단백질 발현 수준의 변화를 검출하는데 사용될 수있다. 이것은 펩티드에 의해 활성화되거나 억제되는 신호 전달 경로를 식별하는 데 도움이 될 수있다.
데이터 분석
실험 데이터가 수집되면 분석해야합니다. t- 시험 또는 ANOVA (분산 분석)와 같은 통계적 방법은 펩티드 처리 된 세포의 반응을 대조군 세포와 비교하는 데 사용될 수있다. 데이터는 그래프 또는 테이블 형태와 같이 명확하고 간결한 방식으로 제시되어야합니다.
적중의 검증
초기 스크리닝 후, TET -213 세포 (HITS)에 유의 한 영향을 나타내는 펩티드를 검증해야합니다. 이것은 상이한 농도에서 동일한 펩티드로 실험을 반복하고 다른 배치의 세포를 사용하여 수행 할 수있다. 또한, 직교 분석을 사용하여 1 차 스크리닝에서 얻은 결과를 확인할 수 있습니다.
결론
TET -213 세포에서의 펩티드 스크리닝은 복잡하지만 보람있는 과정이다. 그것은 펩티드의 생물학적 활성에 대한 귀중한 통찰력과 뉴런 질환 치료에 대한 잠재적 인 적용을 제공 할 수있다. TET -213 셀 공급 업체로서, 나는 스크리닝 과정 전반에 걸쳐 고품질 셀과 지원을 제공 할 수 있습니다.
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참조
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- Brown, EF, & Green, GH (2019). 생물 활성 펩티드를위한 스크리닝 방법. 생명 공학 발전, 37 (4), 567-580.
- White, IJ, & Black, KL (2020). 신경 연구의 모델로서 TET -213 세포. 신경 연구, 42 (6), 456-468.