펩티드 연구 개발 영역에서, 카탈로그 펩티드의 순도가 가장 중요합니다. 전용 카탈로그 펩티드 공급 업체로서, 우리는 고객에게 고품질 제품을 제공하는 것의 중요성을 이해합니다. 때로는 초기 합성 및 정제 과정에서 최선의 노력에도 불구하고 카탈로그 펩티드의 추가 정제가 필요할 수 있습니다. 이 블로그에서는 필요할 때 카탈로그 펩티드를 추가로 정화하기위한 다양한 방법과 고려 사항을 탐색 할 것입니다.
왜 추가 정제인가?
카탈로그 펩티드의 추가 정제가 필요한 몇 가지 이유가 있습니다. 첫째, 세포 기반 분석, 생체 내 연구 또는 구조 생물학 연구와 같은 매우 민감한 연구 응용 분야에서 미량의 불순물조차도 실험 결과에 중대한 영향을 줄 수 있습니다. 불순물은 잠재적으로 펩티드의 생물학적 활성을 방해하여 오 탐지 또는 부정을 초래할 수있다.
둘째, 제약과 같은 일부 산업의 규제 요구 사항은 약물 개발에 사용되는 펩티드에 대해 매우 높은 수준의 순도를 요구합니다. 펩티드가 잠재적 치료제로 간주되는 경우, 임의의 불순물은 환자 안전에 위험을 초래할 수 있으므로 추가 정제 단계가 필수적입니다.
크로마토 그래피 방법
반전 - 상 고 - 성능 액체 크로마토 그래피 (RP -HPLC)
RP -HPLC는 펩티드 정제에 가장 널리 사용되는 방법 중 하나입니다. 소수성에 따라 펩티드를 분리합니다. RP -HPLC의 고정상은 소수성 물질, 일반적으로 알킬 사슬이 부착 된 실리카 기반 컬럼입니다 (예 : C18 또는 C8). 상이한 소수성을 갖는 펩티드는 고정 상과 다르게 상호 작용하여 다른 보유 시간을 초래할 것이다.
RP -HPLC를 사용하여 카탈로그 펩티드를 추가로 정제하려면 먼저 적절한 이동 단계를 선택해야합니다. 일반적인 이동상은 물의 혼합물 및 아세토 니트릴 또는 메탄올과 같은 유기 용매로 구성되며, 소량의 산 (예 : Trifluoroacetic acid, TFA)을 첨가하여 피크 모양을 개선합니다. 유기 용매의 구배를 조정함으로써, 우리는 불순물로부터 표적 펩티드의 분리를 최적화 할 수있다.
예를 들어, 카탈로그 펩티드와 같은 경우LL-37, 항균성 펩티드, 잠재적 인 치료 적용을 갖는 항균성 펩티드 인 RP -HPLC는 생성물 또는 분해 된 단편에 의한 나머지 합성을 제거하는데 사용될 수있다. 정제 된 LL -37은보다 정확한 항균 활성 분석에 사용될 수있다.
이온 - 교환 크로마토 그래피
이온 - 교환 크로마토 그래피는 전하에 따라 펩티드를 분리합니다. 양이온 교환 크로마토 그래피 (CEX)와 음이온 교환 크로마토 그래피 (AEX)의 두 가지 주요 유형이 있습니다. CEX에서, 고정상은 음으로 하전 된 그룹을 가지며, 순 양적 전하를 갖는 펩티드는 이에 결합 할 것이다. AEX에서, 고정상은 양으로 하전되며, 음으로 하전 된 펩티드가 유지 될 것이다.
CEX와 AEX 사이의 선택은 펩티드의 등전점 (PI)에 의존한다. 펩티드의 PI가 이동상의 pH 미만인 경우, 펩티드는 순 음전하를 갖고 AEX를 사용될 수있다. 반대로, PI가 이동 단계의 pH보다 높으면 CEX가 더 적합합니다.
예를 들어,Ureistachykinin II, 특정 전하 프로파일을 갖는 펩티드는 이온 교환 크로마토 그래피를 사용하여 추가로 정제 될 수있다. 이동 상 pH 및 이온 강도를 신중하게 선택함으로써, 우리는 다른 하전 된 불순물로부터 표적 펩티드를 잘 분리 할 수있다.
전기 영동 방법
나트륨 도데 실 설페이트 - 폴리 아크릴 아미드 겔 전기 영동 (SDS- 페이지)
SDS- 페이지는 주로 단백질 분석에 사용되지만 어느 정도 펩티드 정제에도 적용될 수 있습니다. SDS- 페이지에서, 펩티드는 SDS에 의해 변성되고 분자량에 따라 분리된다. 펩티드는 전기장의 영향 하에서 폴리 아크릴 아미드 겔을 통해 이동한다.
전기 영동 후, 겔을 염색하여 펩티드를 시각화 할 수있다. 이어서, 표적 펩티드에 상응하는 밴드는 겔로부터 절제 될 수 있고, 펩티드는 겔 매트릭스로부터 용리 될 수있다. 그러나이 방법에는 몇 가지 제한 사항이 있습니다. 용리 과정은 복잡 할 수 있으며 정제 중에 펩티드의 약간의 손실이있을 수 있습니다. 또한, SDS는 정제 된 펩티드로부터 완전히 제거하기가 어려울 수있다.
모세관 전기 영동 (CE)
모세관 전기 영동은 펩티드에 대한 강력한 분리 기술입니다. 높은 분리 효율, 짧은 분석 시간 및 낮은 샘플 소비를 제공합니다. CE는 전하 - 대량 비율에 따라 펩티드를 분리합니다. 모세관 영역 전기 영동 (CZE), 모세관 겔 전기 영동 (CGE) 및 미셀 전기 성 크로마토 그래피 (MEKC)와 같은 CE 모드가 있습니다.
CZE는 펩티드 분석 및 정제에 가장 일반적으로 사용되는 모드입니다. CZE에서, 펩티드는 전기장 하에서 완충 모세관으로 분리된다. 분리는 펩티드의 전기 영동 이동성의 차이에 기초한다. CE는 펩티드 식별 및 정제의 정확도를 향상시키기 위해 UV 흡수, 형광 및 질량 분석법과 같은 다양한 검출 방법과 결합 될 수있다.
다른 고려 사항
용해도
펩티드의 용해도는 정제 과정에서 중요한 요소이다. 펩티드가 정제 용매에서 용해도가 좋지 않은 경우, 정제 중에 침전을 유발할 수 있으며, 이는 펩티드의 회복 및 순도에 영향을 미칩니다. 펩티드 용해도를 향상시키기 위해, 우리는 용매의 pH를 조정하거나, 용매를 첨가하거나, 특정 가용 제제를 사용할 수있다.
순도 분석
추가 정제 후, 펩티드의 순도를 분석하는 것이 중요하다. 순도 분석을위한 일반적인 방법에는 고 - 성능 액체 크로마토 그래피 (HPLC), 질량 분석법 (MS) 및 핵 자기 공명 (NMR)이 포함됩니다. HPLC는 펩티드의 크로마토 그래피 순도에 대한 정보를 제공 할 수있는 반면, MS는 펩티드의 분자량을 확인하고 상이한 질량으로 임의의 불순물을 검출 할 수있다. NMR은 원자 수준에서 펩티드의 구조와 순도를 결정하는데 사용될 수있다.
결론
카탈로그 펩티드 공급 업체로서 우리는 고객에게 고품질 펩티드를 제공하기 위해 노력하고 있습니다. 카탈로그 펩티드의 추가 정제가 필요할 때, 우리는 크로마토 그래피 방법, 전기 영동 방법 및 용해도 및 순도 분석과 같은 기타 고려 사항을 포함하여 다양한 방법을 가지고 있습니다. 적절한 정제 방법을 신중하게 선택하고 정제 조건을 최적화함으로써 펩티드가 고객의 높은 순도 요구 사항을 충족하도록 할 수 있습니다.
카탈로그 펩티드가 필요하거나 추가 정제 서비스가 필요한 경우 조달 및 논의를 위해 저희에게 연락하십시오. 펩티드 연구 및 개발 요구를 충족시키기 위해 귀하와 협력하기를 기대합니다.
참조
- Snyder, LR, Kirkland, JJ 및 Dolan, JW (2010). 현대식 액체 크로마토 그래피 소개. 와일리.
- Jorgenson, JW 및 Lukacs, KD (1981). 모세관 영역 전기 영동. 분석 화학, 53 (8), 1298-1302.
- 영국 Laemmli, 영국 (1970). 박테리오파지 헤드의 조립 동안 구조 단백질의 절단. 자연, 227 (5259), 680-685.