형질 감염은 분자 생물학에서 중요한 기술로, 외래 핵산을 세포에 도입하여 연구자들이 유전자 기능, 단백질 발현 및 세포 신호 전달 경로를 연구 할 수있게한다. 인간 신경 아세포종 세포주 인 TET-213 세포는 신경 특성으로 인해 신경 과학 연구에 일반적으로 사용됩니다. 이 블로그 게시물에서는 TET-213 세포 공급 업체로서의 경험을 활용하여 TET-213 세포를 효과적으로 수혈하는 방법에 대한 통찰력을 공유 할 것입니다.
TET-213 세포 이해
형질 감염 과정을 탐구하기 전에 TET-213 세포의 특성을 이해하는 것이 중요합니다. 이들 세포는 인간 신경 아세포종으로부터 유래되며 신경 돌기 및 신경 마커를 발현하는 능력과 같은 뉴런 특징을 나타낸다. 이들은 표준 세포 배양 조건에서 잘 자라는 부착 세포이며, 일반적으로 태아 소 혈청 (FBS) 및 항생제가 보충 된 배지에서 부착 된 세포이다.
올바른 형질 감염 방법을 선택합니다
세포를 형질 감염시키는 데 사용할 수있는 몇 가지 방법이 있으며, 각각 고유 한 장점과 한계가 있습니다. 형질 감염 방법의 선택은 형질 감염 될 핵산의 유형, 세포 유형 및 원하는 형질 감염 효율을 포함한 다양한 인자에 의존한다. 다음은 TET-213 세포에 적합한 몇 가지 일반적인 형질 감염 방법입니다.
지질 기반 형질 감염
지질 기반 형질 감염은 세포에 핵산을 도입하는 데 가장 널리 사용되는 방법 중 하나입니다. 여기에는 핵산과 복합체를 형성하는 지질 기반 시약의 사용이 포함되며, 그 후 세포 내 이입을 통해 세포에 의해 흡수된다. 지질 기반 형질 감염은 비교적 쉽게 수행되며 TET-213 세포를 포함하여 많은 세포 유형에서 높은 형질 감염 효율을 달성 할 수 있습니다.
전기 천공
전기 천공은 전기장을 사용하여 세포막에 임시 기공을 생성하여 핵산이 세포에 들어갈 수있는 물리적 방법입니다. 이 방법은 1 차 세포와 같은 다른 방법을 사용하여 형질 전환하기 어려운 세포를 형질 감염시키는 데 특히 유용합니다. 그러나, 전기 천공은 세포에 더 손상 될 수 있으며 높은 형질 감염 효율을 달성하기 위해 전기 천공 파라미터의 최적화가 필요할 수있다.
바이러스 성 변환
바이러스 성 변환은 핵산을 세포로 전달하기 위해 바이러스 성 벡터를 사용하는 것을 포함한다. 바이러스 성 벡터는 원하는 핵산을 운반하도록 조작하고 세포를 효율적으로 감염시킬 수있는 바이러스로부터 유래된다. 바이러스 성 변환은 높은 형질 감염 효율을 달성 할 수 있으며 TET-213 세포를 포함한 광범위한 세포 유형을 형질 감염시키는 데 사용될 수 있습니다. 그러나 바이러스 형질 도입에는 특수 장비와 전문 지식이 필요하며 바이러스 벡터 사용과 관련된 잠재적 안전 문제가 있습니다.
형질 감염을 위해 세포 준비
성공적인 형질 감염에는 적절한 세포 준비가 필수적입니다. TET-213 세포를 형질 감염을 위해 준비 할 때 따라야 할 몇 가지 단계는 다음과 같습니다.
세포 문화
FBS 및 항생제가 보충 된 적합한 세포 배양 배지에서 TET-213 세포를 유지하십시오. 지수 성장 단계를 유지하기 위해 세포를 정기적으로 통과시킵니다. 열악한 생리적 상태의 세포는 형질 감염 효율이 낮을 수 있기 때문에 형질 감염에 건강하고 활발하게 성장하는 세포를 사용하는 것이 중요합니다.
세포 시드
배양 접시 또는 다중 웰 플레이트에서 TET-213 세포를 적절한 밀도로 시드하십시오. 시드 밀도는 형질 감염 방법과 실험 유형에 따라 다릅니다. 지질 기반 형질 감염의 경우, 50-80%의 시드 밀도가 일반적으로 권장됩니다.
세포 인큐베이션
형질 감염 전 24 시간 동안 5% CO2로 37 ℃에서 가습 된 인큐베이터에서 시드 된 세포를 형질 감염 과정에서 파종 과정에서 부착하고 회복 할 수있게한다.
형질 감염을 수행합니다
세포가 준비되면 이제 형질 감염을 수행 할 시간입니다. 다음은 TET-213 세포의 지질 기반 형질 감염에 대한 일반적인 프로토콜입니다.
형질 감염 시약을 준비하십시오
지질 기반 형질 감염 시약을 준비하려면 제조업체의 지침을 따르십시오. 전형적으로, 이는 시약을 적합한 형질 감염 배지에서 희석시키는 것을 포함한다.
핵산을 준비하십시오
플라스미드 DNA 또는 siRNA와 같은 형질 감염 될 핵산을 제조한다. 적합한 형질 감염 배지에서 핵산을 희석시킨다.
형질 감염 복합체를 형성하십시오
희석 된 형질 감염 시약 및 희석 된 핵산을 튜브에 혼합하고 15-30 분 동안 실온에서 배양하여 형질 감염 복합체의 형성을 허용합니다.
형질 감염 복합체를 세포에 첨가하십시오
세포에서 배양 배지를 제거하고 신선한 형질 감염 배지로 교체하십시오. 형질 감염 복합체를 세포에 낙하하고 판에 부드럽게 소용돌이 치고 복합체를 고르게 분포하십시오.
세포를 배양하십시오
핵산의 유형 및 실험에 따라 적절한 시간 동안 5% CO2로 37 ℃에서 가습 된 인큐베이터에서 형질 감염된 세포를 배양한다. 플라스미드 DNA 형질 감염의 경우, 24-48 시간의 배양 시간은 전형적으로 유전자 발현을 허용하기에 충분하다.
형질 감염 효율 평가
형질 감염 후, 형질 감염 효율을 평가하여 형질 감염이 성공했는지 여부를 결정하는 것이 중요합니다. 형질 감염 효율을 평가하는 데 사용할 수있는 몇 가지 방법이 있습니다.
형광 현미경
형질 감염된 핵산이 GFP와 같은 형광 단백질을 암호화하는 경우, 형광 현미경을 사용하여 형질 감염된 세포를 시각화 할 수 있습니다. 형광 세포의 백분율은 형질 감염 효율의 추정으로 사용될 수있다.
유세포 분석법
유세포 분석법을 사용하여 형광 마커 또는 세포 표면 항원의 발현에 기초하여 형질 감염된 세포의 백분율을 정량화 할 수있다. 이 방법은 형광 현미경과 비교하여 형질 감염 효율의보다 정확하고 정량적 측정을 제공합니다.
웨스턴 블 롯팅 또는 QPCR
형질 감염된 핵산이 관심있는 단백질을 암호화하는 경우, 웨스턴 블 롯팅 또는 QPCR을 사용하여 각각 단백질 또는 mRNA 수준에서 단백질의 발현을 검출 할 수있다. 이 방법은 유전자 발현 수준 및 형질 감염된 단백질의 기능에 대한 정보를 제공 할 수있다.
일반적인 형질 감염 문제 문제 해결
형질 감염은 때때로 어려울 수 있으며 몇 가지 일반적인 문제가 발생할 수 있습니다. 다음은 일반적인 형질 감염 문제에 대한 몇 가지 문제 해결 팁입니다.
낮은 형질 감염 효율
- 핵산의 품질과 양을 점검하십시오. 핵산이 순수하고 고품질인지 확인하십시오.
- 형질 감염 시약 농도, 핵산 대 반주 비율 및 인큐베이션 시간과 같은 형질 감염 조건을 최적화합니다.
- 세포 건강과 생존력을 확인하십시오. 형질 감염 전에 세포가 건강하고 적극적으로 자라는 지 확인하십시오.
- 다른 형질 감염 방법이나 시약을 시도하십시오.
세포 독성
- 형질 감염 시약 또는 핵산의 농도를 줄입니다.
- 형질 감염 조건을 최적화하여 세포 손상을 최소화하십시오.
- 세포에 독성이 적은 다른 형질 감염 방법 또는 시약을 사용하십시오.
가변 형질 감염 효율
- 세포가 균등하게 그리고 적절한 밀도로 시딩되어 있는지 확인하십시오.
- 형질 감염 복합체를 세포에 추가하기 전에 철저히 섞는다.
- 변동성을 최소화하기 위해 일관된 조건 하에서 세포를 배양하십시오.
결론
TET-213 세포를 형질 감염시키는 것은 도전적이지만 보람있는 과정이 될 수 있습니다. 올바른 형질 감염 방법을 선택하고, 셀을 올바르게 준비하고, 적절한 프로토콜을 따라 가면 높은 형질 감염 효율을 달성하고 신뢰할 수있는 결과를 얻을 수 있습니다. 질문이 있거나 TET-213 셀 형질 감염에 대한 추가 지원이 필요한 경우 주저하지 말고 저희에게 연락하십시오. 우리는 TET-213 세포의 주요 공급 업체이며 고품질 세포, 형질 감염 시약 및 기술 지원을 제공 할 수 있습니다.
TET-213 세포 외에도갈라 난 (인간),,,사이클로 (RGDFC), 그리고다이 노르핀 A (1-13), 아미드, 돼지. 이 펩티드는 신경 과학, 암 연구 및 약물 발견과 같은 다양한 연구 응용에 사용될 수 있습니다.
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참조
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