펩티드 활성 제약 성분 (API)은 현대 의학에서 중요한 역할을하며 광범위한 질병에 대한 표적적이고 효과적인 치료 옵션을 제공합니다. 주요 펩티드 API 공급 업체로서, 우리는 가장 엄격한 조절 표준을 충족하는 고품질 펩티드를 생산하는 것의 중요성을 이해합니다. 펩티드 API의 생산의 주요 단계 중 하나는 정제이며, 이는 원하는 수준의 순도 및 품질을 달성하기 위해 불순물 및 오염 물질을 제거 할 수 있도록합니다. 이 블로그 게시물에서는 펩티드 API의 정화와 관련된 단계에 대해 논의 할 것입니다.
1 단계 : 조잡한 펩티드 합성
펩티드 API의 정제의 첫 번째 단계는 조상 펩티드의 합성이다. 이것은 전형적으로 펩티드의 화학적 합성에 널리 사용되는 방법 인 고체 상 펩티드 합성 (SPP)을 사용하여 수행된다. SPP에서, 펩티드는 고체 지지대, 일반적으로 수지로 한 번에 하나의 아미노산을 만들어 낸다. 아미노산은 합성 과정에서 원치 않는 반응을 방지하기 위해 특정 그룹으로 보호됩니다. 일단 펩티드 사슬이 조립되면, 수지로부터 절단되어 압축 된 펩티드를 얻습니다.
2 단계 : 초기 여과
조잡한 펩티드 합성 후, 반응 혼합물은 원하는 펩티드뿐만 아니라 미지의 아미노산, 커플 링 시약 및 수지 단편과 같은 다양한 불순물을 함유한다. 첫 번째 정제 단계는 여과를 통해 이러한 큰 입자와 불용성 불순물을 제거하는 것입니다. 여과지 또는 막 필터를 사용한 간단한 여과 공정은 가시 입자를 효과적으로 제거 할 수 있으며, 조잡한 펩티드를 함유하는 비교적 명확한 용액을 남길 수 있습니다.
3 단계 : 분제 크로마토 그래피
제조 크로마토 그래피는 펩티드 API의 정제의 핵심 단계이다. 그것은 다른 물리적 및 화학적 특성에 기초하여 원하는 펩티드를 나머지 불순물로부터 분리하는데 사용된다. 역상 크로마토 그래피 (RPC), ION- 교환 크로마토 그래피 (IEC) 및 크기 배제 크로마토 그래피 (SEC)를 포함하여 펩티드 정제에 사용할 수있는 몇 가지 유형의 크로마토 그래피 기술이 있습니다.
- 역상 크로마토 그래피 (RPC): RPC는 펩티드 정제에 가장 일반적으로 사용되는 크로마토 그래피 기술입니다. 그것은 펩티드와 고정 상 사이의 소수성 상호 작용에 기초하여, 이는 전형적으로 소수성 수지이다. 조상 펩티드 용액을 RPC 컬럼에 로딩하고, 극성 용매 (예 : 물) 및 비극성 용매 (예 : 아세토 니트릴)의 구배를 사용하여 펩티드를 용리시킨다. 상이한 소수성을 갖는 펩티드는 다른 시간에 용리되어 분리를 허용한다. 예를 들어, 펩티드와 같은조향-글루오-오오에-오소RPC를 사용하여 효과적으로 정제 될 수 있습니다.
- 이온 교환 크로마토 그래피 (IEC): IEC는 전하에 따라 펩티드를 분리합니다. IEC의 고정상은 전하 된 기능 그룹 (양이온 또는 음이온 성)을 갖는 수지입니다. 원유 펩티드 용액을 IEC 컬럼에 로딩하고, 상이한 이온 강도 또는 pH 값을 갖는 완충제의 구배를 사용하여 펩티드를 용리시킨다. 전하가 다른 펩티드는 상이한 친화력으로 수지에 결합하고 다른 시간에 용리합니다.
- 크기 배제 크로마토 그래피 (Sec): SEC는 크기에 따라 펩티드를 분리합니다. SEC의 고정상은 다공성 수지이고, 펩티드는 수지의 기공으로 들어가는 능력에 따라 분리된다. 더 큰 펩티드가 먼저 용리되고 더 작은 펩티드가 뒤 따릅니다. SEC는 종종 RPC 또는 IEC 후 연마 단계로 사용되며 남은 골재 또는 저 분자량 불순물을 제거합니다.
4 단계 : 탈염
분화 된 크로마토 그래피 후, 정제 된 펩티드 분획은 크로마토 그래피 완충제로부터 염 및 다른 소분자를 함유 할 수있다. 탈염은 순수한 펩티드 용액을 얻기 위해 이들 염을 제거하는 과정이다. 탈염을위한 일반적인 방법 중 하나는 투석이며, 여기서 펩티드 용액이 반 투과성 막이있는 투석 백에 넣고 낮은 염 농도를 갖는 완충제에 대해 투석된다. 또 다른 방법은 겔 여과 크로마토 그래피로, 크기 차이에 기초하여 염으로부터 펩티드를 분리 할 수있다.
5 단계 : 동결 건조
동결 건조로도 알려진 동결 건조는 정제 과정의 최종 단계입니다. 정제 된 펩티드 용액을 동결 한 다음 진공 상태에서 승화시켜 물을 제거하는 것을 포함합니다. 동결 건조는 펩티드 용액으로부터의 물을 제거 할뿐만 아니라 분해 및 미생물 성장을 방지함으로써 펩티드를 안정화시킨다. 생성 된 동결 건조 된 펩티드는 쉽게 저장하고 수송 할 수있는 건조 분말이다.
6 단계 : 품질 관리
품질 관리는 펩티드 API 정제 과정의 필수 부분입니다. 정제 및 동결 건조 후, 펩티드는 순도, 정체성 및 품질을 보장하기 위해 다양한 분석 기술을 사용하여 분석된다. 펩티드 품질 관리에 사용되는 일반적인 분석 기술 중 일부는 고성능 액체 크로마토 그래피 (HPLC), 질량 분석법 (MS), 핵 자기 공명 (NMR) 및 아미노산 분석을 포함한다.
- 고성능 액체 크로마토 그래피 (HPLC): HPLC는 펩티드를 남은 불순물로부터 분리하고 그들의 양을 정량화함으로써 펩티드의 순도를 결정하는데 사용된다. 잘 정제 된 펩티드는 HPLC 크로마토 그램에서 단일 날카로운 피크를 가져야하며, 이는 높은 수준의 순도를 나타냅니다.
- 질량 분석법 (MS): MS는 분자량을 결정함으로써 펩티드의 동일성을 확인하는 데 사용된다. 펩티드의 측정 된 분자량은 아미노산 서열로부터 계산 된 이론적 분자량과 일치해야한다.
- 핵 자기 공명 (NMR): NMR은 펩티드의 구조 및 형태를 결정하는 데 사용된다. 펩티드에서 아미노산 잔기의 화학 환경에 대한 정보를 제공하고 동일성을 확인하는 데 도움이 될 수 있습니다.
- 아미노산 분석: 아미노산 분석은 펩티드의 아미노산 조성을 결정하는데 사용된다. 측정 된 아미노산 조성물은 펩티드 서열에 기초한 예상 조성물과 일치해야한다.
7 단계 : 포장 및 저장
펩티드 API가 품질 관리 테스트를 통과하면 포장 및 저장 준비가 가능합니다. 펩티드는 전형적으로 산화 및 분해를 방지하기 위해 질소 또는 아르곤 대기 하에서 멸균 바이알 또는 앰풀에 포장된다. 포장 재료는 펩티드와 호환되도록 선택하고 수분, 산소 및 빛에 대한 좋은 장벽을 제공해야합니다. 펩티드 API의 저장 조건은 안정성에 의존하며 장기 품질을 보장하기 위해 신중하게 제어해야합니다.
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참조
- Alberts, B., Johnson, A., Lewis, J., Raff, M., Roberts, K., & Walter, P. (2002). 세포의 분자 생물학. 갈랜드 과학.
- Jones, J. (1991). 아미노산 및 펩티드 합성. 옥스포드 대학 출판부.
- Snyder, LR, Kirkland, JJ 및 Glajch, JL (2010). 실용적인 HPLC 방법 개발. John Wiley & Sons.